細(xì)胞避免支原體污染的方法 要從多方面避免支原體的污染:
(1)嚴(yán)格操作要求:工作開始要先用75%酒精消毒手部以及袖口、瓶口等;在進(jìn)行多種細(xì)胞培養(yǎng)操作時,所用器具(如移液槍等)要嚴(yán)格區(qū)分;在進(jìn)行換液或傳代操作時,注射器和滴管不要觸及細(xì)胞培養(yǎng)瓶瓶口,以免把細(xì)菌帶到培養(yǎng)液中污染其他細(xì)胞。細(xì)胞培養(yǎng)實驗室應(yīng)制定嚴(yán)格的管理制度,按照規(guī)范的實驗程序操作。
(2)保證細(xì)胞培養(yǎng)基和器材無菌,器材一般都經(jīng)過輻射處理,基本可以保證無菌,商業(yè)化CD培養(yǎng)基一般也能保證無菌。如實驗室有發(fā)現(xiàn)支原體感染,已經(jīng)開啟的培養(yǎng)基不宜繼續(xù)使用。
(3)在培養(yǎng)基中加入適量抗生素:對支原體比較有效的抗生素為四環(huán)素類和大環(huán)內(nèi)酯類,如卡那霉素50μg/ml,一些氟喹諾酮也有抑制支原體生長的作用。也有專用的支原體清除劑可用來預(yù)防細(xì)胞被支原體污染,如在培養(yǎng)基中添加Plasmocin™ prophylactic,工作濃度5μg/ml。
從可靠來源引進(jìn)、使用細(xì)胞:特別是知名的信譽(yù)良好的專門機(jī)構(gòu),如ATCC、基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)細(xì)胞中心等,這些機(jī)構(gòu)對細(xì)胞質(zhì)量進(jìn)行一系列檢測。細(xì)胞一旦購置或從別處引入,均應(yīng)及早留種凍存,一旦發(fā)生污染可重新復(fù)蘇培養(yǎng)。建立良好的種子庫管理規(guī)章制度,并定期對實驗室中的培養(yǎng)物進(jìn)行支原體檢測。
控制環(huán)境污染:可以使用諾福支原體清除噴霧進(jìn)行空間消毒,干霧滅菌方案構(gòu)成:諾福支原體清除劑 + 歐菲姆干霧滅菌設(shè)備。
歐菲姆干霧過氧化氫滅菌器,采用了全球進(jìn)的霧化技術(shù),霧化粒徑平均達(dá)到3—5微米,配合諾福支原體清除劑使用,滅菌效果能對嗜熱脂肪桿菌芽孢降低6個對數(shù)值。增效了空間擴(kuò)散均勻性,迅速彌漫充滿整個密閉空間不放過每一處死角,其均勻性、無殘留及對機(jī)器無傷害特征非常吻合細(xì)胞房環(huán)境消毒及培養(yǎng)箱里面消毒。
諾諾福支原體清除劑特點(diǎn):
1,殺菌效力廣譜高效:同時殺滅200多種微生物,高效清除支原體感染,30分鐘對黑色枯草芽孢、嗜熱脂肪芽孢桿菌均能穩(wěn)定達(dá)到6個對單位殺滅率。
2,歐盟進(jìn)口,無味、無毒,對人體、環(huán)境安全。
3,驗證資料齊全:可提供殺菌效力驗證;殘留驗證;材料兼容性驗證三項驗證的詳細(xì)資料,可提供驗證模版。易于通過GMP驗證。
歐菲姆干霧滅菌設(shè)備的特點(diǎn)
1,全球進(jìn)的霧化技術(shù)。干霧微粒均勻達(dá)到3-5微米,全球領(lǐng)先的干霧技術(shù),完全不留死角。
2,殺菌時間超短,1小時可完成整個滅菌流程,電源連接,方便移動,是實驗室、無菌室、細(xì)菌間、細(xì)胞房環(huán)境消毒。
3,體積小、重量輕,可方便使用大空間潔凈區(qū)(多點(diǎn)布置),和小空間無菌室滅菌。