支原體污染的嚴重性

（1）細胞外形可以沒有明顯的變化，支原體可以與細胞共存，污染后細胞液不會死亡，培養(yǎng)基一般不發(fā)生渾濁；

（2）使用被支原體污染的細胞做實驗會嚴重影響實驗的結果，因為支原體會抑制細胞生長；導致染色體畸變；細胞膜抗原性改變；細胞復蘇后存活率降低等。

（3）影響細胞的代謝和功能：培液中的精氨酸被支原體大量消耗，引起細胞蛋白質、DNA、rRNA、mRNA的合成障礙；支原體活動使培液成分發(fā)生改變（如發(fā)酵型支原體降解糖類產生酸性物質），影響細胞代謝。

（4）培養(yǎng)過程中細胞破碎較多，培養(yǎng)基pH變化明顯，需要頻繁更換新鮮培養(yǎng)基；

（5）細胞被支原體污染后會形成共生體系導致污染不斷擴大。

四．細胞避免支原體污染的方法 要從多方面避免支原體的污染：

（1）嚴格操作要求：工作開始要先用75%酒精消毒手部以及袖口、瓶口等；在進行多種細胞培養(yǎng)操作時，所用器具（如移液槍等）要嚴格區(qū)分；在進行換液或傳代操作時，注射器和滴管不要觸及細胞培養(yǎng)瓶瓶口，以免把細菌帶到培養(yǎng)液中污染其他細胞。細胞培養(yǎng)實驗室應制定嚴格的管理制度，按照規(guī)范的實驗程序操作。

（2）保證細胞培養(yǎng)基和器材無菌，器材一般都經過輻射處理，基本可以保證無菌，商業(yè)化CD培養(yǎng)基一般也能保證無菌。如實驗室有發(fā)現(xiàn)支原體感染，已經開啟的培養(yǎng)基不宜繼續(xù)使用。

（3）在培養(yǎng)基中加入適量抗生素：對支原體比較有效的抗生素為四環(huán)素類和大環(huán)內酯類，如卡那霉素50μg/ml，一些氟喹諾酮也有抑制支原體生長的作用。也有專用的支原體清除劑可用來預防細胞被支原體污染，如在培養(yǎng)基中添加Plasmocin™ prophylactic，工作濃度5μg/ml。

從可靠來源引進、使用細胞:特別是知名的信譽良好的專門機構,如ATCC、基礎醫(yī)學細胞中心等,這些機構對細胞質量進行一系列檢測。細胞一旦購置或從別處引入，均應及早留種凍存，一旦發(fā)生污染可重新復蘇培養(yǎng)。建立良好的種子庫管理規(guī)章制度，并定期對實驗室中的培養(yǎng)物進行支原體檢測。

控制環(huán)境污染：可以使用諾福支原體清除噴霧進行空間消毒，干霧滅菌方案構成:諾福支原體清除劑 + 歐菲姆干霧滅菌設備。

歐菲姆干霧過氧化氫滅菌器，采用了全球進的霧化技術，霧化粒徑平均達到3—5微米，配合諾福支原體清除劑使用，滅菌效果能對嗜熱脂肪桿菌芽孢降低6個對數(shù)值。增效了空間擴散均勻性，迅速彌漫充滿整個密閉空間不放過每一處死角，其均勻性、無殘留及對機器無傷害特征非常吻合細胞房環(huán)境消毒及培養(yǎng)箱里面消毒。

諾諾福支原體清除劑特點：

1，殺菌效力廣譜高效：同時殺滅200多種微生物，高效清除支原體感染，30分鐘對黑色枯草芽孢、嗜熱脂肪芽孢桿菌均能穩(wěn)定達到6個對單位殺滅率。

2，歐盟進口，無味、無毒，對人體、環(huán)境安全。

3，驗證資料齊全：可提供殺菌效力驗證；殘留驗證；材料兼容性驗證三項驗證的詳細資料，可提供驗證模版。易于通過GMP驗證。

歐菲姆干霧滅菌設備的特點

1，全球進的霧化技術。干霧微粒均勻達到3－5微米，全球領先的干霧技術，完全不留死角。

2，殺菌時間超短，1小時可完成整個滅菌流程，電源連接，方便移動，是實驗室、無菌室、細菌間、細胞房環(huán)境消毒。

3，體積小、重量輕，可方便使用大空間潔凈區(qū)（多點布置），和小空間無菌室滅菌。