支原體污染的嚴(yán)重性
(1)細(xì)胞外形可以沒(méi)有明顯的變化,支原體可以與細(xì)胞共存,污染后細(xì)胞液不會(huì)死亡,培養(yǎng)基一般不發(fā)生渾濁;
(2)使用被支原體污染的細(xì)胞做實(shí)驗(yàn)會(huì)嚴(yán)重影響實(shí)驗(yàn)的結(jié)果,因?yàn)橹гw會(huì)抑制細(xì)胞生長(zhǎng);導(dǎo)致染色體畸變;細(xì)胞膜抗原性改變;細(xì)胞復(fù)蘇后存活率降低等。
(3)影響細(xì)胞的代謝和功能:培液中的精氨酸被支原體大量消耗,引起細(xì)胞蛋白質(zhì)、DNA、rRNA、mRNA的合成障礙;支原體活動(dòng)使培液成分發(fā)生改變(如發(fā)酵型支原體降解糖類產(chǎn)生酸性物質(zhì)),影響細(xì)胞代謝。
(4)培養(yǎng)過(guò)程中細(xì)胞破碎較多,培養(yǎng)基pH變化明顯,需要頻繁更換新鮮培養(yǎng)基;
(5)細(xì)胞被支原體污染后會(huì)形成共生體系導(dǎo)致污染不斷擴(kuò)大。
四.細(xì)胞避免支原體污染的方法 要從多方面避免支原體的污染:
(1)嚴(yán)格操作要求:工作開(kāi)始要先用75%酒精消毒手部以及袖口、瓶口等;在進(jìn)行多種細(xì)胞培養(yǎng)操作時(shí),所用器具(如移液槍等)要嚴(yán)格區(qū)分;在進(jìn)行換液或傳代操作時(shí),注射器和滴管不要觸及細(xì)胞培養(yǎng)瓶瓶口,以免把細(xì)菌帶到培養(yǎng)液中污染其他細(xì)胞。細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)制定嚴(yán)格的管理制度,按照規(guī)范的實(shí)驗(yàn)程序操作。
(2)保證細(xì)胞培養(yǎng)基和器材無(wú)菌,器材一般都經(jīng)過(guò)輻射處理,基本可以保證無(wú)菌,商業(yè)化CD培養(yǎng)基一般也能保證無(wú)菌。如實(shí)驗(yàn)室有發(fā)現(xiàn)支原體感染,已經(jīng)開(kāi)啟的培養(yǎng)基不宜繼續(xù)使用。
(3)在培養(yǎng)基中加入適量抗生素:對(duì)支原體比較有效的抗生素為四環(huán)素類和大環(huán)內(nèi)酯類,如卡那霉素50μg/ml,一些氟喹諾酮也有抑制支原體生長(zhǎng)的作用。也有專用的支原體清除劑可用來(lái)預(yù)防細(xì)胞被支原體污染,如在培養(yǎng)基中添加Plasmocin™ prophylactic,工作濃度5μg/ml。
從可靠來(lái)源引進(jìn)、使用細(xì)胞:特別是知名的信譽(yù)良好的專門機(jī)構(gòu),如ATCC、基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)細(xì)胞中心等,這些機(jī)構(gòu)對(duì)細(xì)胞質(zhì)量進(jìn)行一系列檢測(cè)。細(xì)胞一旦購(gòu)置或從別處引入,均應(yīng)及早留種凍存,一旦發(fā)生污染可重新復(fù)蘇培養(yǎng)。建立良好的種子庫(kù)管理規(guī)章制度,并定期對(duì)實(shí)驗(yàn)室中的培養(yǎng)物進(jìn)行支原體檢測(cè)。
控制環(huán)境污染:可以使用諾福支原體清除噴霧進(jìn)行空間消毒,干霧滅菌方案構(gòu)成:諾福支原體清除劑 + 歐菲姆干霧滅菌設(shè)備。
歐菲姆干霧過(guò)氧化氫滅菌器,采用了全球進(jìn)的霧化技術(shù),霧化粒徑平均達(dá)到3—5微米,配合諾福支原體清除劑使用,滅菌效果能對(duì)嗜熱脂肪桿菌芽孢降低6個(gè)對(duì)數(shù)值。增效了空間擴(kuò)散均勻性,迅速?gòu)浡錆M整個(gè)密閉空間不放過(guò)每一處死角,其均勻性、無(wú)殘留及對(duì)機(jī)器無(wú)傷害特征非常吻合細(xì)胞房環(huán)境消毒及培養(yǎng)箱里面消毒。
諾諾福支原體清除劑特點(diǎn):
1,殺菌效力廣譜高效:同時(shí)殺滅200多種微生物,高效清除支原體感染,30分鐘對(duì)黑色枯草芽孢、嗜熱脂肪芽孢桿菌均能穩(wěn)定達(dá)到6個(gè)對(duì)單位殺滅率。
2,歐盟進(jìn)口,無(wú)味、無(wú)毒,對(duì)人體、環(huán)境安全。
3,驗(yàn)證資料齊全:可提供殺菌效力驗(yàn)證;殘留驗(yàn)證;材料兼容性驗(yàn)證三項(xiàng)驗(yàn)證的詳細(xì)資料,可提供驗(yàn)證模版。易于通過(guò)GMP驗(yàn)證。
歐菲姆干霧滅菌設(shè)備的特點(diǎn)
1,全球進(jìn)的霧化技術(shù)。干霧微粒均勻達(dá)到3-5微米,全球領(lǐng)先的干霧技術(shù),完全不留死角。
2,殺菌時(shí)間超短,1小時(shí)可完成整個(gè)滅菌流程,電源連接,方便移動(dòng),是實(shí)驗(yàn)室、無(wú)菌室、細(xì)菌間、細(xì)胞房環(huán)境消毒。
3,體積小、重量輕,可方便使用大空間潔凈區(qū)(多點(diǎn)布置),和小空間無(wú)菌室滅菌。