應(yīng)用：凝膠色譜不但可以用于分離測(cè)定高聚物的相對(duì)分子質(zhì)量和相對(duì)分子質(zhì)量分布，同時(shí)根據(jù)所用凝膠填料不同，可分離脂溶性和水溶性物質(zhì)，分離相對(duì)分子質(zhì)量的范圍從幾百萬(wàn)到100以下。近年來(lái)，凝膠色譜也廣泛用于小分子化合物。相對(duì)分子質(zhì)量相近而化學(xué)結(jié)構(gòu)不同的物質(zhì)，不可能通過(guò)凝膠滲透色譜法達(dá)到完全分離純化的目的。凝膠色譜不能分辨分子大小相近的化合物，相對(duì)分子質(zhì)量相差需在10%以上才能得到分離。

原理：凝膠具有化學(xué)惰性，它不具有吸附、分配和離子交換作用。讓被測(cè)量的高聚物溶液通過(guò)一根內(nèi)裝不同孔徑的色譜柱，柱中可供分子通行的路徑有粒子間的間隙（較大）和粒子內(nèi)的通孔（較�。�。當(dāng)聚合物溶液流經(jīng)色譜柱（凝膠顆粒）時(shí)，較大的分子（體積大于凝膠孔隙）被排除在粒子的小孔之外，只能從粒子間的間隙通過(guò)，速率較快；而較小的分子可以進(jìn)入粒子中的小孔，通過(guò)的速率要慢得多；經(jīng)過(guò)一定長(zhǎng)度的色譜柱，分子根據(jù)相對(duì)分子質(zhì)量被分開(kāi)，相對(duì)分子質(zhì)量大的在前面（即淋洗時(shí)間短），相對(duì)分子質(zhì)量小的在后面（即淋洗時(shí)間長(zhǎng)）。溶質(zhì)的淋出體積與其分子量有關(guān)，分子量愈大，其淋出體積愈小。

a. 常溫流動(dòng)相: 水相、THF、DMF、DMSO、三氯甲烷、六氟異丙醇、a-氯奈；

b. 高溫流動(dòng)相：DMF（80℃），三氯苯；

c. 可以測(cè)相對(duì)分子量的流動(dòng)相：水相、THF、DMF、DMSO、三氯甲烷、六氟異丙醇、a-氯奈、三氯苯

d .可以測(cè)絕對(duì)分子量的流動(dòng)相：水相、THF、DMF、三氯苯

不同流動(dòng)相對(duì)應(yīng)的分子量范圍：DMF：3000-100萬(wàn)；THF：500-200萬(wàn)；水相：300-50萬(wàn)；氯仿相：500-200萬(wàn)。分子量接近限值的，測(cè)試不太準(zhǔn)確，低于下限會(huì)跟溶劑峰連在一起測(cè)不準(zhǔn)。

1．樣品量：可為液體、粉末、塊狀樣品，粉末樣品10mg，液體5-10ml；

2．要求在指定流動(dòng)相中有較好的溶解性，送樣前需要自行確認(rèn)好樣品在指定流動(dòng)相中的溶解性，難溶樣品自行溶好再送樣, 溶解后的樣品要透明均一，過(guò)濾頭不堵；如果樣品溶解性較差，要求提前溶解好（濃度要求在2-5mg /ml左右），或者提供合理溶解方法（如果由實(shí)驗(yàn)室溶解，費(fèi)用問(wèn)題請(qǐng)?zhí)崆白稍儯?/p>

3．樣品溶好之后，有機(jī)相樣品需要過(guò)0.45 μm濾膜，水相樣品需要過(guò)0.22 μm濾膜，樣品濃度一般控制在2-5 mg/mL；樣品溶好過(guò)濾膜后，可能會(huì)損失部分樣品信息，建議送粉末；

4．高溫相要保證在該測(cè)試溫度下樣品不分解；并樣品不能含F(xiàn)，含F(xiàn)會(huì)分解污染柱子

1. 為什么樣品要求在指定流動(dòng)相中溶解性要好？

因?yàn)镚PC（凝膠滲透色譜）本質(zhì)上是一個(gè)色譜測(cè)試，是通過(guò)色譜柱分離不同分子量的成分，溶解性不好的話是需要過(guò)濾后測(cè)試的，不溶成分的分子量就無(wú)法測(cè)試，而且如果樣品溶解度差的話，樣品有可能會(huì)在色譜柱析出，毀壞柱子

2. 為什么測(cè)試結(jié)果跟預(yù)期分子量差別較大？

第一，gpc的測(cè)試原理是每種流動(dòng)相都有對(duì)應(yīng)的一種標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)作出的標(biāo)準(zhǔn)曲線，樣品測(cè)試結(jié)果要跟標(biāo)曲比較，然后得出測(cè)試結(jié)果，所以大多數(shù)流動(dòng)相得到的結(jié)果是樣品的相對(duì)分子量，如果樣品跟標(biāo)準(zhǔn)品差別太大的話，測(cè)試結(jié)果就有可能跟真實(shí)值相差較大；第二，GPC一般測(cè)試樣品都是聚合物，預(yù)期分子量只是基于實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的一個(gè)預(yù)期值，所以有時(shí)候跟實(shí)際情況有出入也是正常的。

3. 相對(duì)分子量和絕對(duì)分子量的區(qū)別？

第一，測(cè)試原理不同：相對(duì)分子量時(shí)通過(guò)建立標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)曲線，待測(cè)樣品與之相比得到分子量分布；絕對(duì)分子量是通過(guò)三聯(lián)檢測(cè)器，主要是激光檢測(cè)器在樣品顆粒表面散射角度不同通過(guò)數(shù)學(xué)模型計(jì)算分子量分布；第二，檢測(cè)器不同：相對(duì)分子量主要是折光示差檢測(cè)器，絕對(duì)分子量需要示差、粘度、光散射三聯(lián)檢測(cè)器；第三，檢測(cè)分子量范圍不同：相對(duì)分子量可以檢測(cè)較小分子量，而一般分子量在幾萬(wàn)以上才適合絕對(duì)分子量

GPC各個(gè)流動(dòng)相之間有什么差別？

不同流動(dòng)相對(duì)應(yīng)分子量范圍不同：DMF:3000-100萬(wàn)；THF：500-200萬(wàn)；水相300-50萬(wàn)；氯仿500-200萬(wàn)。高溫相要保證在該測(cè)試溫度下樣品不分解，目前高溫流動(dòng)相是三氯苯相，是針對(duì)高溫溶解后降溫會(huì)析出的樣品，如果溶解后降溫不析出樣品可測(cè)常溫GPC。