圓二色光譜(簡(jiǎn)稱CD)是應(yīng)用最為廣泛的測(cè)定蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)的方法,是研究稀溶液中蛋白質(zhì)構(gòu)象的一種快速、簡(jiǎn)單、較準(zhǔn)確的方法。它可以在溶液狀態(tài)下測(cè)定,較接近其生理狀態(tài)。而且測(cè)定方法快速簡(jiǎn)便,對(duì)構(gòu)象變化靈敏,所以它是目前研究蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)的主要手段之一,并已廣泛應(yīng)用于蛋白質(zhì)的構(gòu)象研究中,也可用來(lái)測(cè)定核酸和多糖的立體結(jié)構(gòu)。
液體CD和固體CD
1,液體CD請(qǐng)務(wù)必逐個(gè)備注樣品成分及寄樣濃度,同時(shí)需備注下用什么溶液稀釋;固體CD需備注樣品成分。
2,如需解析二級(jí)結(jié)構(gòu),需要知道氨基酸數(shù)目和分子量,可以提供數(shù)據(jù)分析服務(wù)
液體CD
1,測(cè)試時(shí)需要空白溶劑做對(duì)照扣背景,麻煩樣品及溶劑至少各備5ml;
2,樣品及溶劑的濃度對(duì)測(cè)試影響較大,不宜過(guò)高或過(guò)低(濃度過(guò)高,會(huì)超電壓,數(shù)據(jù)不準(zhǔn);濃度過(guò)低,沒(méi)有信號(hào)):不同物質(zhì),濃度不同,測(cè)試時(shí)不對(duì)濃度進(jìn)行摸索
a.如之前測(cè)過(guò)CD或有相關(guān)文獻(xiàn),建議按對(duì)應(yīng)濃度準(zhǔn)備;b.如沒(méi)測(cè)過(guò)CD或無(wú)文獻(xiàn),但掃過(guò)紫外全譜,建議優(yōu)選紫外濃度的一半配制樣品,如不合適再調(diào)整(直接用紫外對(duì)應(yīng)濃度,測(cè)CD的話濃度偏高);c.如以上均無(wú),建議按0.5mg/ml來(lái)配(蛋白質(zhì)樣品,濃度一般0.1-0.5mg/ml),但無(wú)法保證該濃度合適
3,測(cè)試結(jié)果一般提供原始數(shù)據(jù),若需擬合后百分比數(shù)據(jù)請(qǐng)下單前告知;
4,每個(gè)樣品默認(rèn)測(cè)一次,若需平行則按照多個(gè)樣品收費(fèi)。
固體CD
1,將樣品和溴化鉀(光譜純度)1:150混合后研磨盡可能細(xì)致;
2,光譜純溴化鉀研磨細(xì)致作為空白對(duì)照。注:溴化鉀吸潮,樣品郵寄前密封好一些。
3,樣品量(至少):150-200 mg/樣, 是粉末樣品。
4.如果樣品透過(guò)率不好,建議采用積分球模式。
當(dāng)用壓片法或石蠟油研磨法進(jìn)行固體粉末樣品測(cè)試時(shí),要盡可能地研磨獲得細(xì)小均勻的樣品顆粒。采用石蠟油糊方法時(shí),必須注意某些憎水有機(jī)化合物可能溶于石蠟油中,這時(shí)所得CD光譜在某種意義上應(yīng)視為溶液CD光譜。采用壓片法測(cè)試固體CD時(shí),在保證手性樣品的定性濃度達(dá)到CD光譜儀檢測(cè)要求的同時(shí),片越薄越透明越好(但切忌破損)。在某些情況下,壓片法不適用于手性抗衡陰離子存在下的固體誘導(dǎo)CD光譜的測(cè)定