圓二色光譜(簡稱CD)是應(yīng)用最為廣泛的測定蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)的方法,是研究稀溶液中蛋白質(zhì)構(gòu)象的一種快速、簡單、較準確的方法。它可以在溶液狀態(tài)下測定,較接近其生理狀態(tài)。而且測定方法快速簡便,對構(gòu)象變化靈敏,所以它是目前研究蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)的主要手段之一,并已廣泛應(yīng)用于蛋白質(zhì)的構(gòu)象研究中,也可用來測定核酸和多糖的立體結(jié)構(gòu)。
液體CD和固體CD
1,液體CD請務(wù)必逐個備注樣品成分及寄樣濃度,同時需備注下用什么溶液稀釋;固體CD需備注樣品成分。
2,如需解析二級結(jié)構(gòu),需要知道氨基酸數(shù)目和分子量,可以提供數(shù)據(jù)分析服務(wù)
液體CD
1,測試時需要空白溶劑做對照扣背景,麻煩樣品及溶劑至少各備5ml;
2,樣品及溶劑的濃度對測試影響較大,不宜過高或過低(濃度過高,會超電壓,數(shù)據(jù)不準;濃度過低,沒有信號):不同物質(zhì),濃度不同,測試時不對濃度進行摸索
a.如之前測過CD或有相關(guān)文獻,建議按對應(yīng)濃度準備;b.如沒測過CD或無文獻,但掃過紫外全譜,建議優(yōu)選紫外濃度的一半配制樣品,如不合適再調(diào)整(直接用紫外對應(yīng)濃度,測CD的話濃度偏高);c.如以上均無,建議按0.5mg/ml來配(蛋白質(zhì)樣品,濃度一般0.1-0.5mg/ml),但無法保證該濃度合適
3,測試結(jié)果一般提供原始數(shù)據(jù),若需擬合后百分比數(shù)據(jù)請下單前告知;
4,每個樣品默認測一次,若需平行則按照多個樣品收費。
固體CD
1,將樣品和溴化鉀(光譜純度)1:150混合后研磨盡可能細致;
2,光譜純溴化鉀研磨細致作為空白對照。注:溴化鉀吸潮,樣品郵寄前密封好一些。
3,樣品量(至少):150-200 mg/樣, 是粉末樣品。
4.如果樣品透過率不好,建議采用積分球模式。
當用壓片法或石蠟油研磨法進行固體粉末樣品測試時,要盡可能地研磨獲得細小均勻的樣品顆粒。采用石蠟油糊方法時,必須注意某些憎水有機化合物可能溶于石蠟油中,這時所得CD光譜在某種意義上應(yīng)視為溶液CD光譜。采用壓片法測試固體CD時,在保證手性樣品的定性濃度達到CD光譜儀檢測要求的同時,片越薄越透明越好(但切忌破損)。在某些情況下,壓片法不適用于手性抗衡陰離子存在下的固體誘導(dǎo)CD光譜的測定