10000×Sybr Green II核酸染料
   

SYBR Green II主要用于RNA和單鏈DNA電泳。是EB和替代品，無致癌性，超敏感性。用作常規(guī)電泳時，須將商品化的核酸MARKER作一定倍數的稀釋（），這樣才能得到比較理想結果。

產品特點：

無毒性：屬花箐類染料，容易生物降解，無致癌毒性。

靈敏度高：至少可檢出20pg ssDNA或RNA，高于EB染色法25～100倍。

信噪比高：樣品熒光信號強，背景信號低。

操作簡單：與EB一樣，在預制膠和電泳過程中染料不降解;而電泳后染色過程也只需30分鐘且無需脫色或沖洗，即可直接用紫外凝膠透射儀或可見光透射儀觀察。

適用范圍廣：可選擇電泳前染色(膠染法)或電泳后染色(泡染法);適用于瓊脂糖凝膠電泳、聚丙烯 酰胺凝膠電泳、脈沖電場凝膠電泳和毛細管電泳等;可用于 ssDNA 或 RNA 染色。

使用方便：對分子生物學中常用的酶(如：Taq 酶、反轉錄酶、內切酶、T4連接酶等)沒有抑制作用。

經濟：價格比銀染便宜。

使用方法：

1.膠染法(用法同EB)(方法)

　　(1) 熔膠后，冷卻膠至50℃左右，加入Sybr Green II 核酸染料。每100mL膠中加入3～5μL Sybr Green II 10,000× 儲液，以此比例類推。

　　(2) 按照常規(guī)方法進行電泳。

　　注意事項：

　　(1) 此方法染色可以準確確定核酸片段分子量，染料用量相對較少。1mL染料大約可以做300塊 100mL的膠。

　　(2) 由于Sybr Green II熱穩(wěn)定性較差，不能在熱的膠溶液中直接添加，需要等待溶液冷卻至50℃左右才能添加。搖晃，振蕩或者翻轉以保證染料充分混勻。

　　2.泡染法

　　(1) 按照常規(guī)方法進行電泳。

　　(2) 用pH 7.0～8.5 的緩沖液(如：TAE，TBE 或 TE)，按照10000﹕1的比例稀釋Sybr Green II 10,000× 儲液，混勻，制成1× 染色液。

　　(3) 將凝膠小心地放入合適的容器中，如聚丙烯容器中。緩慢加入足量的1× 染色液浸沒凝膠。用鋁箔等蓋住容器使染料避光。室溫振蕩染色10～30分鐘，染色時間因凝膠濃度和厚度而定。聚丙烯酰胺凝膠直接在玻璃平皿上染色，將配好的1× 染色液輕輕地倒在膠板上，讓其均勻地覆蓋整個膠板，并染色30分鐘。玻璃平皿必須預先經過硅烷化溶液處理(避免染料吸附在玻璃表面上)。

　　注：用泡染法染色時，可以精確確定核酸片段分子量。但染料用量較多。

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